浅谈二手液相色谱仪的计算方法

1、 对仪器的一般要求

所用的仪器为二手液相色谱仪。色谱柱的填料和流动相的组分应按各品种项下的规定。常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。后者以十八烷基硅烷键合硅胶zui为常用，辛基键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用；离子交换填料，用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等，用于分子排阻色谱等。注样量一般为数微升。除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。

在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法（附录Ⅳ A ）项下对溶剂的要求。

正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。一般色谱图约于20分钟内记录完毕。

2、系统适用性试验

按各品种项下要求对二手液相色谱仪进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的zui小理论板数、分离度和拖尾因子。

(1) 色谱柱的理论板数(N，用于定量表示色谱柱的分离效率，简称柱效) 。 在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间t R （以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半高峰宽(Wh/2) ，按n ＝5.54(tR /Wh/2) 2计算色谱柱的理论板数，如果测得理论板数低于各品种项下规定的zui小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。

(2) 分离度(R)

定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度R 的计算公式为： R ＝2(tR2——t R1)/( W1＋W 2) 。式中 t R2为相邻两峰中后一峰的保留时间；t R1为相邻两峰中前一峰的保留时间；W 1及W 2为此相邻两峰的峰宽。除另外有规定外，分离度应大于1.5。

(3) 拖尾因子(T)

为保证测量精度，特别当采用峰高法测量时，应检查待测峰的拖尾因子T 是否符合各品种项下的规定，或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求。拖尾因子计算公式为：T ＝W 0.05h /(2d1) 。式中W 0.05h 为0.05峰高处的峰宽；d 1为峰极大至峰前沿之间的距离。除另有规定外，T 应在0.95——1.05间。也可按各品种校正因子测定项下，配制相当于80％、100％和120％的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成三种不同浓度的溶液，分别注样3次，计算平均校正因子，其相对标准偏差应不大于2.0％。